感谢大家的帮忙 终於有分离出来了>< 关键应该就是在於我的packing液和elute液极性改变太大吧 一但产生龟裂 就会使Gel下沉 并且堆积的样子 所以我的第一个compound会堆在洞口 第二个compound会逼近 然後压力累积到一个程度(?) Gel会一次流出来 这时候 第一个和第二个已经mix了 就会失败 这是我的心得 给大家参考一下 ※ 引述《lunarblue (green52*死智障)》之铭言： : ※ 引述《kentai (为什麽没有爱 在我们之间)》之铭言： : : 我还是没做出来>< 可恨阿 : : 不论如何都得不到一个点的管>< : : 我把我的步骤写一下 看大家看一下有什麽错误 : 很多的部分前面的版友都讲过了.. : 我也是建议你请人带你做一次吧... : 看起来阁下应该没啥流column的经验 : : 东西有三个点 剪一片约六公分的TLC 用纯EA去跑 : 一般少用单一溶剂去流管柱 : : 距离上端0.5cm有一个点 再间隔1cm有第二点(产物) 再间隔1cm有第三点 : : 感觉是分的很开 : Rf值太高了.. : 这样你EA一灌下去,Rf值0.5跟0.8的点老实说没啥分离到... : 请将主要的点调在Rf＝0.3左右,也就是说请换冲提液的极性.. : 用hexane/EA这个系统是比较普遍的选择.. : : 准备Packing Gel 用的是silica gel 使用的column是250ml 直径大概5cm吧 : : 用Hexane packing ,Gel大概有20cm高，加压1次10分钟 做5次 : 如果你真的觉得那麽难分,可以用湿填的,效果会比较好（不过你的应该不至於难分） : : load大概有3cm ，等到跑到乳化面的时候，慢慢加入EA 开始跑 : loading太高,一般请在1公分左右.. : 请换大一点的管柱不然就分两次流吧 : 你极性就已经那麽高了,还loading那麽厚一层,这样当然很容易mix在一起 : : 用12x75mm的试管去接 20管左右有第1点 23~26有两点 27~点消失约80管 有三点 : : 所以我大部分的产物都混在三点里面 好痛苦阿>< : : 另外 Gel常常跑了却产生龟裂的现象 明明没乾 不知道为什麽@@ : 因为冲提液极性变太快了 : 基本上你packing时就可以用hexane/EA（Rf＝0.3左右）的系统去packing了 : 然後流的时候就不用换冲提液了,自然也就不会龟裂了 : 如果你真的觉得後面出来的点太慢了,可以慢慢提高冲提液极性将後面的冲出来 : 当然前提是你前面的点已经出来了 : 如果是大量的而且又如你所说点与点之间分隔得很远的话 : 那其实用一下简单的flash column也可以快速得到不错的分离效果 : : 不知道大家有什麽意见>< Thx! --

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