※ 引述《HPLC (高效能液相層析儀)》之銘言： : 標題: [實驗] HPLC Column 壓力之問題 : 時間: Mon Dec 12 11:02:44 2011 : 大家早安~~ : 小弟我呢 現在賴以為生的HPLC半製備耐水項C18管柱 : 現在壓力變好大QAQ : 有機項去沖洗 壓力跟以前差不多 : 但是換到水項 壓力變得好大好大QAQ : 以前全水項1.8 mL/min 壓力是60 kgf/cm^2 現在已經快破百了= =" : 我也用ACN沖了兩天了 (0.2 mL/min): : 還是沒用 請有經驗的大大可以幫忙小弟我嗎= =" : 我也打給Sales了 他說 先打打看 如果圖跟以前差很多 : 那 只能放棄那隻管柱 死馬當活馬醫 用逆洗 : 可是我覺得逆洗 感覺挺危險的 = =" : 管柱10 × 250 mm 5 μm : 先謝謝各位大大們嚕~ : : : -- :

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) : ◆ From: 163.17.15.25 : 推 dk191726:用1:1(ACN/H2O) 洗看看 12/12 11:27 : → dk191726:逆洗沒差拉 自己在坯管子也會這樣洗 12/12 11:28 : → HPLC:那 D大 你是如何逆洗的?? 12/12 11:41 : 推 kalen123:有沒有可能是濾頭阻塞，如果單是管塞的話應該有機相也掛 12/12 12:47 : → HPLC:沒接Column的背壓沒問題 正常 12/12 12:49 : 推 tony15899:水有換嗎, 濾過的水還是會長微生物的 12/12 13:55 : → shiaobau:水項的管路都固定那條嗎?? 是的話 不上column 洗一下管路 12/12 14:06 : → HPLC:水一個禮拜我就會換新的 最多兩個禮拜 12/12 14:09 : → HPLC:怎麼洗管路?? 可以教一下嗎@@? 12/12 14:10 : 推 ricky40711:降不下時也會逆洗，反接管柱1:1洗看看吧 12/12 15:26 : → ricky40711:如果rate用1.8 ml/min洗，洗約15分鐘就好，勿太久 12/12 15:27 : 推 tony15899:水你沒加甚麼添加劑就只是水的話 還是常換吧 12/12 16:14 : → HPLC:水最多一個禮拜 0.05% TFA 最多兩個禮拜 12/12 17:16 : → HPLC:那我假設 如果長微生物的話 那該怎麼辦呢??? 12/12 17:39 : 推 tony15899:2-3天換水吧 12/12 18:54 : → HPLC:那 微生物只會卡在 solvent 的濾投那裏嗎??? 12/12 20:48 : → HPLC: 頭 12/12 20:48 : → tony15899:沒有遇過 不過有聽說很久以前發生過線路(?)塞住 12/12 22:49 : → tony15899:然後是透明滑滑狀的東西 12/12 22:50 : → HPLC:所以有沒有需要 把有機溶劑 像 MeOH 換到 C D項 沖?? 12/12 22:57 個人是這麼想的: 問題拆開來:管柱、幫浦、degaser、管線 一項一項來看。 (一)如果問題單是出在管柱上的話， 無論是水相或有機相， 你都應該觀察的到壓力昇高的狀況， 但顯然並非如此; 要進一步確認的方法: 你可以將已經確認壓力正常的有機相管線換成水相後重跑一次， 這時有兩個狀況。 ------------------------------------- 狀況1:壓力正常 這說明與管柱無關， 此時你可以把先前的水相溶液換成此時跑的溶液， 如果跑出來壓力正常的話代表你先前跑的水相溶液遭到汙染或是置換， 問題解決。 如果跑出來壓力仍然異常的話， 跳到下一項:管線。 ------------------------------------ 狀況2:壓力異常， 則問題指向管柱內有某種東西與水作用後，造成壓力異常昇高 (雖然我沒見過這種事，降低倒是有看過)， 那就洗洗看能不能把東西反沖出來吧， 不行的話跳到最後一項。 ------------------------------------ (二)下一個是管線(含濾頭) 如果管柱的疑慮排除了， 你可以直接把到幫浦的前端管線拆下來洗一洗， 甲醇、丙酮、MeCN、熱水都可以試試， 記得最後要用二次水沖乾淨， 確保沒有殘留就好。 洗完之後拿起來看看管柱裡面有沒有異物， 沒有的話再裝回去， 用先前的條件試試， 如果還是不行的話跳到下一步。 (三)再來是幫浦或degasser有沒有可能故障， 確定方法很簡單， 在排除了管線、管柱的可能後， 你要做交叉測試。 --------------------------------------------- 用已知正常的pump接頭和異常管線的pump接頭交換; 比方說如果故障的水相是接pump的A端， 那就把管線交換成C端後重跑水相， --------------------------------------------- 如果交換後正常的話代表pump的A端已經故障， 看你們家老闆想不想修。 degasser也是一樣 但要作筆記， 測試完後要交換回來， 不然日後會發生溶液混錯的問題。 此外在進行上述操作時要注意溶液相溶性的問題。 (四)如果以上作法還是不行 把機台關掉， 電源切掉， 在上面放包椰子口味乖乖 然後打電話給經銷商的工程師， 死纏爛打的請他務必來看， 這已經不是個人能解決的問題了。 --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.213.26 ※ 編輯: kalen123 來自: 140.114.213.26 (12/13 00:01)