作者KLAHA (Scars of sabbath)
看板Biology
标题Re: [问题]关於抽质体DNA的问题
时间Tue Feb 17 20:42:55 2004
※ 引述《citrinin (anticitrinin)》之铭言：
: ※ 引述《wwwjjj (......)》之铭言：
: : 在下是刚进实验室的新手
: : 目前还是大学生
: : 想请问各位大大
: : 抽plasmid DNA的步骤中
: : 在加入各种buffor,静置..........
: : 之後有一个步骤:离心後取澄清液
: : 上面的解释说此澄清液含有plasmid DNA
: : 而沉淀物则包含了genomic DNA, proteins, cell debris, SDS ...
: : 我想请问的是genomic DNA不是细菌除了plasmid外的DNA
: : 两者同样是DNA只是大小.形状的不同
: : 为什麽plasmid DNA会溶解而genomic DNA却会沉淀下来
: : 不知道这样形容会不会很模糊
: : thank you:)))
: 一个牛津大学的博士告诉我是被 protein 给'绞'进去的
听你说法应该是用alkaline lysis
离下菌,去掉broth
soln 1 : GTE
菌的等张液,维持菌的完好
务必使菌完全悬浮
加soln 2：SDS和NaOH
SDS=detergent,破菌
NaOH=使DNA变性(denature),由双股打开为单股型式
混匀即可,切勿剧烈混合使genome DNA断裂
加soln 3：加酸(我用醋酸钾)
中合soln2,务必混合均匀
此时plasmid DNA因片段较短,马上renature
但genome DNA片段较大,不及马上renature
离心,舍去悬浮(lipid)&沉淀物(protein,genome DNA等),取出液体
加入100% EtOH沉淀,离心
去除上清液(有genome DNA)
留pellet=plasmid DNA
以70% EtOH wash
乾燥後得plasmid DNA,
溶於适量水或TE buffer内
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.222.64.102
1F：→ enisx:不用过phenol/chloroform ? 推 140.112.25.191 02/17
2F：→ KLAHA:技巧高超的如我学姐不必过 *笑* 我有时要 推 61.222.64.102 02/17
3F：→ isotoper:能请问楼上是大学还是研究生吗? 推140.112.240.226 02/17
4F：→ KLAHA:硕一 XD 推 61.222.64.102 02/17
5F：→ isotoper:难怪有背~~好恐怖喔>_<" 推140.112.240.226 02/17
6F：→ eyespot:solnII,III加完才离心吧? 推 140.112.25.165 02/17
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8F：→ HXZ:做久的自然都会记起来 推140.112.213.171 02/18
9F：→ zerpher:应该是plasmid 在PH12.0-12.5不denature吧 推 210.202.68.176 02/18
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