想请教各位达人~ 刚做了细胞内自由态离子浓度之实验~ 因为实验结果非常奇怪~想请教达人们可能原因为何? 实验流程如下~ 先将要测定之细胞用PBS清洗离心三次~ 加入萤光剂 flou-3 AM 摄氏37度避光作用一小时~ (在此想先作确认~此步骤之目的是要让细胞中酵素把flou-3 AM转成flou-3?) 作用完再以PBS清洗~ 之後分三管测吸光~ 我们是测细胞溶液中对Flou-3之吸光度~(530 nm) 1- 1 ml 之Cell solution 测出之吸光值将为F 2- 0.8ml之Cell solution + inomycin + EDTA 测出之吸光值将为F min 3- 0.8ml之Cell solution + inomycin + CaCl2 测出之吸光值将为F Max 用这三个值套入公式去求出Ca含量~ 三管之吸光值如下 F= 0.961 F min= 0.700 F Max= 5.187 ............= ="~F Max高的很异常... 其实细胞溶液在分完三管後还有剩下我们又做了一个管1(1 ml 之Cell solution) 得到结果与之前无异~0.891~ 觉得说细胞都聚集在管三有点牵强~因为他不能算最後一管~如果是最後一管还有可能~ 如果说是细胞都被洗掉了(我们的技术绝对称不上好~)~ 请问为什麽F Max= 5.187? 这不是证明里面有大量的Flou-3~有Flou-3不就代表有细胞存在阿~ 恩~我承认我对这实验并没有完全了解~助教讲的有点模模糊糊~ 如果大大们看了我的实验流程觉得有出问题~缺哪方面的叙述~请务必指出~谢谢~ --

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