加入萤光探测剂 Fluo-3 AM 之後需要等待一段时间，其原因首先是要让 Fluo-3 AM 穿透细胞膜，其次如你所说，要等待细胞内酵素将 Fluo-3 AM 转变为非通透性之 Fluo-3。 再来，我想你误解了整个实验的原理。 一、你测的是 Fluo-3 在波长 530 nm 的发光值 (emission light intensity) 而非吸光值。该发光值与钙离子浓度成正相关，因此可以作为细胞内钙离子的指标。 二、另两管之目的是在做校正，以便求出正确的钙离子浓度。 Fmax 那管加入 ionomycin 及 CaCl2，让细胞膜通透大量钙离子，所以此时测到的发光值系最大值　(maximum)，代表大量钙进入细胞时，Fluo-3 萤光的饱和值。 相反地，Fmin 那管加入 ionomycin 及 EDTA，让细胞内钙离子流失被螯合剂 EDTA 清除掉，所以此时测到的发光值系最小值 (minimum)，代表无钙存在时， Fluo-3 萤光的背景值。 从以上定义就知道，你们测得的数据没有问题。接着再利用 Fmax, Fmin 两个校正点，将 F 值代入公式（请见厂商说明）可以内插算出待测样品细胞之钙离子浓度。 最後再请问你，你是用何种机器做这个实验？ --