看板Biology
标 题Re: 细胞抽protein的方法
发信站木棉树 (Sat Jun 9 13:40:54 2007)
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※ 引述《[email protected] (燃烧我的小宇宙)》之铭言：
> 想跟大家交流一下，
> 因为最近抽蛋白抽的很痛苦，跑wb看不到预期的band...
> 我要看的蛋白再细胞核内，
> 用自己实验室抽蛋白的方法一直抽不好，
> 不晓得大家抽蛋白会不会sonication?
> 还是会加triton呢?
> 先谢谢各位了!!~
你应该附上你们实验室的lysis buffer成份或是方法步骤
另外，请先确定是不是Western blotting的问题
positive control和negative control都如预期吗?
可能的话，跑胶时拿个别人做过ok的lysate来当positive control
若真的发现是处理cell lysate时的问题
原则上用含SDS或Urea的buffer再加上sonication或是boiling处理就很完全了
有的实验室用非常mild的lysis buffer做例行性protein extraction工作
但是根本没考虑到你想看的protein有可能在过程中都弄掉了
你参考一下罗~
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