※ 引述《WinnieDad (小熊维尼的天才老爹)》之铭言： : 【问题】：已定序的intron loss event，可否仅是PCR时amplified到被转译的基因 : 　　　　　片段，而非真正的lost intron : 【问题起因】：小弟於研究中发现到几个intron loss events并且得到该intron完全 : 　　　　　　　切除的定序结果，为之兴奋不已。但是有教授质疑此结果可能是我做 : 　　　　　　　PCR时复制到刚好已完成转译的片段。 : 【个人看法】：由於整个DNA extraction过程中都有小心做RNase处理，理论上应该 : 　　　　　　　不会发生转译完成的mRNA存在又被RT成cDNA後在PCR时增幅。另外； : 　　　　　　　跑胶的结果也都只有单一条cDNA size的band而已，如果是教授所说 : 　　　　　　　的情况发生，应该会看到原本的基因片段和无intron的片段两条bands : 　　　　　　　同时存在。我用以上这两点解释时是蛮有信心的，可是教授一直在奸 : 　　　　　　　笑，笑的我心发寒… 上文所有的转译，应称为转录 ---- 教授的问题有些是在故意考验你 笑也可能是满意的表现 未必要担心太多 其实我觉得你结果已经相当可信 毕竟一般的 PCR 用的 taq（及其衍生型）根本不能放大 RNA 吧 当然 更直接的证据会是： 把其中一个primer 设计在你认为疑失了的 intron 上 作 PCR 证明该序列已经不存在（於原本的位置） 当然，要以 wildtype 作control 证明你的 primer pair / PCR 是有 work 的 --

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