作者pinrupony (pinrupony)
看板Biology
标题[问题] western作不出来!!快救救我呀...
时间Fri Apr 27 22:56:50 2012
【问题】：B-actin都难压出来，压出来超白的!!
蛋白质浓度是40 ug，蛋白质+sample loading dye加热5分钟，
跑胶的时间约45分钟，室温下，
转渍时间2小时，200 mA，
1抗压1小时，PBST洗15分钟，2抗压1小时，PBST洗20分钟
然後用冷光仪压片30秒一张，B-actin很淡不然就是没有...
请大家帮我解决这个问题...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.205.139.35
1F：→ pinrupony:用的抗体是santa cruz,比例是1:1000 04/27 22:59
2F：→ pinrupony:2抗是invitrogen，比例是1:2000 04/27 23:00
3F：→ dota01:只有ACTIN有问题? 04/27 23:08
4F：→ jsi:可能蛋白质太多，ECL反应光了。冷光仪选择5秒或更少照照看 04/27 23:27
5F：→ jsi:看你推文，抗体用得太浓可能也是问题，b-actin好的一抗可以用 04/27 23:30
6F：→ jsi:到1:10000，通常WB好的二抗1:5000以上不是问题。 04/27 23:34
7F：→ pinrupony:没有..其他target也有这样的问题..就有的时候压得出来 04/28 01:44
8F：→ pinrupony:有的时候就是压不出来...谢谢J大，我会试试看的!! 04/28 01:45
9F：→ teryit:sample保存太久? 04/28 11:14
10F：→ pinrupony:sample是4/11收的，快半个月吧 04/28 12:06
11F：推 vixen:没图没真相, 转渍後blocking前ponceau S染的膜来一张看看 04/29 13:16
12F：推 vixen:冷光仪是啥? CCD吗? 那镜头的光圈是否可调大?另外一抗可过夜 04/29 13:19
13F：推 mindy7794:一抗overnight比较美.. 以前同样条件就压不出来吗 04/29 23:00
14F：推 Ferry:santa cruz的抗体很烂 换millipore的吧 05/13 10:45
15F：推 lyu0001:跟别的实验室借少量抗体做一次看看吧 05/17 15:39
16F：推 pjojpioh:一抗建议overnight, 并且不要使用milk作为一抗的buffer 05/26 23:25
17F：→ pjojpioh:二抗请问是mouse monopolyclone的吗? 05/26 23:26