作者menimie (nobody)
看板Biology
标题[问题] DNA smearing on the gel
时间Mon Sep 3 10:14:29 2012
【问题】:
想解决DNA在agarose gel 上smearing的问题
【问题起因】:
一个月前,我用restriction enzyme切DNA, 在胶上可以有明显的片段
最近再切的时候就整条smear了, 但是Ladder分得很明显 所以不是胶的问题
然後我只incubate buffer 跟水一个小时, 有buffer的会smear
只跟水incubate 的DNA 可以有明显的片段
有试过maxiprep 跟mini prep 的 plasmid
只要跟buffer incubate的就会smear
也把水跟buffer换过了 至少三个不同的buffer
tip 跟tube也换了
连pipette都拆开来泡水清洁overnight了
就是找不出原因
【个人看法】:
应该是有某个地方有污染到DNase 1, 所以跟buffer一起incubate一小时後
整条lane变得很糊
但是该换的都换了 也找不出原因
有请另外一个人帮我试(用他的buffer跟water) 结果没有smear的问题
但是把他的buffer跟水拿来给我做反应
又整条 smear
不知道到底问题在哪里
不好意思中英文混着打
希望有经验的人能分享一下
谢谢
【参考资料/连结】:
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◆ From: 76.181.239.11
1F:→ skybreeze:切的东西是? 酵素时间缩短一些试试看 09/03 11:45
2F:推 vixen:buffer有DNAse污染? 是否buffer有镁离子? 加过量EDTA试看看 09/04 11:56