这个版大概已经近乎是荒废状态了 也不知道发文者问题解决了没 发文者遇到的问题我认为是在第一步骤就要修正才能解决 你动物组织是新鲜的吗? 现采现秤? 绝大部分的软组织都没有用液态氮冷冻後磨碎的必要 你组织愈新鲜愈好 如果组织被冷冻过 建议要在冷冻状态就要进Trizol 而且是愈快磨开愈好 另外就是最後一步不需要花这麽多时间去溶 几十秒就很够了 样品应该尽可能维持在低温状态 ※ 引述《NoahArk (小空)》之铭言： : 想请教各位大大，最近在使用Trizol抽小鼠RNA， : 吸光值260/280都在1.3-1.6左右，大部分都在1.3到1.4左右， : 我抽RNA层的总量抽差不多一半，吸光值260/280还是很低，老师说至少要1.8以上 : 下面是我的操作流程，是不是我抽RNA的过程有错误QAQ : 1. 动物组织秤50mg，先剪成1Ⅹ1 mm2大小面积 在灭过菌的研钵倒液态氮磨碎 : 2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均匀，移至1.5 ml 灭菌过的离心 : 管。 : 3. 样品在室温静置5分钟。 : 4. 加入200μl氯仿(chloroform)，震荡混匀15秒，室温静置15分钟。 : 5. 以12,000 x g於4 °C离心15分钟。 : 6. 离心後会分层，小心取上清液至新的灭菌过离心管，RNA在此层。 : 7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol)，pipetting混合均匀。 : 8. 室温静置10分钟，以12,000 x g於4 °C离心10分钟。 : 9. 使用tip吸取上清液 : 10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol)，震荡混匀样品。 : 11. 以7,500 x g於4 °C离心5分钟。 : 12. 使用tip小心吸取酒精後，在laminar flow操作台风乾 : 13. 加入30μl ddH2O 回溶，pipetting 10-15分 --

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