※ 引述《alfa156 ()》之铭言： : 做过功课了 ㄒ.ㄒ : 但是似乎还是一知半解 : cDNA library 与 full-length cDNA library的差异究竟在哪呢 : 又或者是cDNA与full-length cDNA的差异? : 我以为应该是相同的吧 不是都从mRNA反转录过来的吗?! : 不好意思 因为本身念的是与生科完全不相关的科系 orz : 叨扰了 关於这个问题 我们可以从字面上作回答 1. 什麽是library? 2. 全长cDNA (full-length cDNA) 的定义是什麽? 首先library的意义应该是很清楚的，就是数以万计不同的序列 经过分子生物学技术连接到同一个vector上所形成的"plasmids pool" 这样就是一个library，依照vector本身特性的不同而可有不同用途 依照接上vector的序列本身特性的不同 (可以是 cDNA, random restriction digested fragments, or EST) 可以给予library一个名字: 某某library 把一大群不同的cDNA连接到某个vector上，就是cDNA library [定义full-length cDNA] 基因的转录物是所谓的mRNA，以前的观念是one gene one protein (当然这观念现在知道是错的) 最早full-length cDNA这个名词出现的时候，定义是比较浅薄的 它可以只是一个蛋白质的基因序列，从ATG开始到stop codon结束 这样就是一个最简单的"full-length"---可以转译出一个完整的functional protein 亦即一个完整的open reading frame (ORF) 然而，transcription的产物并不会只具有open reading frame 实际上一个转录物(transcript,或直接称作mRNA)会包含5'-和3'-的UTR 这两个untranslated region将会造成这一条transcript各种特性的不同 包括半生期(亦即stability),转译活性的高低(即表现量的多寡)...等 所以UTR的重要性不可忽视，我们不能只注重ORF而不去理会UTR 於是乎所谓的full-length必须有更精确的定义，他必须具有完整的 UTR以及当中的ORF，这样的序列才保有所有的特性，并且真正是存在於细胞内的 (你不会再细胞内看到没有UTR只有ORF的mRNA吧) 将这样的mRNA纯化，并作出第一股cDNA 这样得到的产物就是"full-length cDNA" [既然如此 理应当所有的cDNA都是full-length的吧?] 当然不是，因为我们纯化mRNA的时候 拿到的产物会是一大群mixture，里头会包含: a. 含有3'-poly(A)也有5'-CAP的 b. 仅有3'-poly(A)以及up stream sequence(可能只是部分的的ORF) c. 仅有5'-CAP以及down stream sequence(可能只是部分的的ORF) d. 仅含有部分的ORF . . . 等 mRNA在细胞质里头会断裂成各式各样的片段，纯化的过程也可能造成断裂 最後纯化出来的mixture里头，仅有a.项是full-length mRNA 其他都不是全长，而(好像)叫做expression tag(EST) <------这个我不是很懂 所以要做出full-length cDNA library，你必须先去除非a.以外的其他杂项 这是需要良好的分生技术的 最後经由纯化出来full-length mRNA做出来的就是full-length cDNA 以及所谓的"full-length cDNA library" 讲完了 -- 常用数学符号资料库： ＋－×÷±⊕＝≒≠≡≡＜＞≦≧ ∴∵∫∮∩∪㏑㏒√→∞∠△° ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩ ΑΒΓΔΕΖΗΘΙΚΛΜΝΞΟΠΡΣΤΥΦΧΨΩ αβγδεζηθικλμνξοπρστυφχψω(欢迎多多提供) --

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