想要请问抽RNA的先进 请问细胞收下来之後 要马上就抽RNA 或是有什麽办法能保存? 因为有时候要收时间点 想要全部收完再一次抽RNA 转cDNA 加RNAlater冰 4度C http://www.ambion.com/techlib/prot/bp_7020.pdf ? 或是加了Trizol之後 冰-80!? 再加Trizol之前 我细胞是要先加入少量PBS(一般细胞用 无RNase-free)打散 还是可以先离心呈pellet状後 去上清 再加入Trizol打散 怎麽样做比较好!? 那抽完RNA转成cDNA後 要如何去订cDNA浓度 测OD!? 因为一直抽不好 我抽完RNA 测OD 260/280都有1.8以上 然後跑胶 (没有用特定的RNA gel, 只是用1% agar gel, 100mV, 8mins, 糊掉, 没有18S.28S分明的band) 但还是硬着头皮坐下去 取1ug的RNA 加DNase 然後再RT转成cDNA 转完测OD 值都差不多 1ug~1.5ug (但里面含有enzyme buffer...这个值不可信吧!?) 然後PCR 使用GAPDH primer(约200bp) 35cycle 都有出来 但P我自己基因的一般PCR primer(约500bp) 有的有 有的没有(应该是要P到的) 有加positive control 是OK的 我主要的目的是要做real time PCR 但在抽RNA品质那麽不一糟糕的状况下 实在不知道data.........@@ 所以想要请问先进们的经验 或是有什麽资料我可以去阅读的 麻烦大家指点 谢谢 :> --

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