作者euphorbia (where to go)
看板Biotech
标题[问题] 刮细胞要用cell lysis buffer(RIPA)或PBS就好?
时间Thu Apr 27 01:59:08 2006
刮细胞时是应该加入RIPA(含protease inhibitor)再刮,还是先用PBS刮下来
收集至离心管後,移去上清液,再加入RIPA(含protease inhibitor)?
若先加入PBS来刮细胞,会不会因为尚未加入protease inhibitor於PBS,
使得在刮细胞过程中,因为细胞破裂,导致protease释出而分解破坏protein?
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◆ From: 59.113.68.94
1F：推 asthma:PBS须加proteinase inhibitor cocktail 这样应该回答问题了 04/27 02:29
2F：推 ghjkl:理论上刮细胞不太会使细胞破裂或说破的很少 04/27 08:59
3F：→ ghjkl:所以才能够刮下来之後离心再用RIPA将细胞打破 04/27 09:00
4F：→ mandible:PBS不一定要加PROTEIN INHIBITOR阿 04/27 14:31
5F：推 pj0611:性的刮细胞方式还是很难避免不会有细胞破裂..我赞成要加 04/27 16:56
6F：推 blence:我不了解,PBS用来wash与resuspend,既然後面有个步骤要离去 04/27 20:28
7F：→ blence:上清液,那破掉的细胞以及released protease也会在这个步骤댠 04/27 20:30
8F：→ blence:被移走了呀,如果担心有影响,多用PBS洗一次或动作快一点应该 04/27 20:31
9F：→ blence:就可以解决了吧?(有些lab是用trypsin收细胞,那不是更危险?) 04/27 20:32