作者aggaci (有气质的台客)
看板Biotech
标题请问有没有人做IP-->2D的??
时间Fri Apr 28 00:02:42 2006
标题的意思是做完IP然後再跑2D的
最近作类似的实验
就是以streptavidin beads去抓有biotin lebel的DNA
以rehydration buffer将和此DNA结合的蛋白质elute出来
(跟IP原理很像吧)
作了几次，elute出来的蛋白质都非常非常少
我用一样的作法跑普通SDS-PAGE时，有很多蛋白质，也有差异
但是要做2D时，蛋白质、DNA、beads的量全部加4倍
照理说，应该看到的蛋白质要比1D多很多
但是并没有，还少很多!
我的作法是以离心收下beads
wash=>将beads拿去煮10分钟=>再加rehydration buffer
=>取上清液(还剩大概60ul buffer没取到，因为想避免取到beads)
此60 ul有拿去跑SDS-PAGE，结果"几乎"没东西!
难不成都还在beads里吗??怪了，都煮过了哩!
(含有urea的溶液不能煮，所以才先煮beads)
因为用这个方法的人很少，IP的人比较多
不过方法类似
所以想请教做IP後再做2D的人有没有此问题呢?如何解决哩?
谢谢~
--
http://0rz.net/da0PG 我的相簿....
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (04/28 00:10)
※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (04/28 00:11)