※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言： : 标题的意思是做完IP然後再跑2D的 : 最近作类似的实验 : 就是以streptavidin beads去抓有biotin lebel的DNA : 以rehydration buffer将和此DNA结合的蛋白质elute出来 : (跟IP原理很像吧) : 作了几次，elute出来的蛋白质都非常非常少 : 我用一样的作法跑普通SDS-PAGE时，有很多蛋白质，也有差异 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 可否请问 什麽作法?.. : 但是要做2D时，蛋白质、DNA、beads的量全部加4倍 : 照理说，应该看到的蛋白质要比1D多很多 : 但是并没有，还少很多! : 我的作法是以离心收下beads : wash=>将beads拿去煮10分钟=>再加rehydration buffer : =>取上清液(还剩大概60ul buffer没取到，因为想避免取到beads) : 此60 ul有拿去跑SDS-PAGE，结果"几乎"没东西! : 难不成都还在beads里吗??怪了，都煮过了哩! : (含有urea的溶液不能煮，所以才先煮beads) : 因为用这个方法的人很少，IP的人比较多 : 不过方法类似 : 所以想请教做IP後再做2D的人有没有此问题呢?如何解决哩? : 谢谢~ 看不大懂.. 可否请问到底是 IP 没东西还是 IP 完跑 2D 後东西不见了? 目的是否是要钓 transcription factor ? 如果是要钓 transcription factor 为何会预期 PAGE 上看的到明显的 band? bead 上到底蛋白质多不多? (是没 elute 下来还是根本极少蛋白质bind 在 bead上?) (何不取一点 bead 直接跑 PAGE ?) 且 IP 完跑 2D 的目的为何 ? --

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