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标 题Re: [问题] 刮细胞要用cell lysis buffer(RIPA)或PBS就好?
发信站清华生命科学 BBS (Sun Apr 30 10:46:21 2006)
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※ 引述《[email protected] (where to go)》之铭言：
> 刮细胞时是应该加入RIPA(含protease inhibitor)再刮,还是先用PBS刮下来
> 收集至离心管後,移去上清液,再加入RIPA(含protease inhibitor)?
> 若先加入PBS来刮细胞,会不会因为尚未加入protease inhibitor於PBS,
> 使得在刮细胞过程中,因为细胞破裂,导致protease释出而分解破坏protein?
我想不出要先加PBS刮下来再换成RIPA的
而且可溶性的蛋白质在 PBS 下面也是会溶（一些）的
再制换成 RIPA, 原本溶在 PBS 中的不就损失了
会用到 PBS 的 应该是：
先把细胞用 trypsin 或 EDTA 打下来以後
离心 去上清液
加PBS wash
再离心 去上清液
加 RIPA
这样的流程
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莫非定律:
到了期末才会想起期初曾选了一门课却一直没去上
补充定律:
拿到成绩单才发现上了一学期的课忘了去考期末考
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