※ 引述《elderbear (暧昧不好不要暧昧)》之铭言： : 我是参考某篇 paper 的作法 可以参阅一下，会比较快进入状况。基础PCR 作者： 张建裕:张建国/着 http://www.books.com.tw/exep/prod/booksfile.php?item=0010266910 : PCR program : 95度 10min ^^-->时间长了些，很可能减低酵素活性，个人觉得3min以内，甚至可略 : 95度 1min ___ : 55度 2min |45cycles : 72度 2min ___| : 72度 7min : 所使用的 primer 经过软体测试 ，Tm值大概是 57~60 大致算法有两种，一种是粗略的Tm=ax2+bx3 (a：A,T个数；b：G,C个数) 另一种为热力学参数去算的，个人是用软体为DNAStar : 看文章说大片段的可以考虑用 pfu pfu相当的powerful，国外品质比国内的好很多，也较稳定，价格也较贵 在点突变技术上相当好用，可参考http://www.stratagene.com/manuals/200518.pdf 之前曾用过粉暴力的用法，去点突变约3.5kb的质体 黏合温度花了20分钟拉梯度（实验室穷没梯度的PCR，为了省材料）， 延伸温度花了24分钟，跑了20cycles，有做出成功产物。 : 你们所使用的 program (如果是用 pfu) 大概是怎样的呢? : 如果不是用 pfu...那是用什麽呢? : 还有我是不是忽略了什麽可以调整的地方? 结论：延伸温度可以先试试5min左右，再视情况调整，比较保险 :p 供参考罗～ --

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