※ 引述《[email protected] (realm)》之铭言： : 我的selectable marker是kanamycin... : 查阅网路上的一般用量是50ug/ml... : 也有人说过...kanamycin很强...所以可以减少用量... : 想请问有经验的人, 如果增加用量 (如100ug/ml) 是否可能会杀死所有的菌... : 还是可以提高筛选的成功率?? : 另外, 由於一直clone不到某一基因...(而每一个步骤都蛮确定没有问题... : 也都作了各种control) : 所以怀疑, 该基因对细菌本身可能有毒性... : 请问, 如果真的是如此, 那该怎麽办呢?? 是否就没有机会clone这个基因了?? : PS. 目前使用的strain为DH5alpha : 先谢过~~:) 1. 我是用25ug/ml，就有效果！ 书上是写working conc.为30ug/ml 用太高，会把菌真的杀光光！ 2. 你是要产蛋白质吗？ 有考虑此蛋白质是不是对菌本身抑制用作？ 若有的话，那要换调控较严谨的质体与system！ 3. 把质体利用甲基化酵素作"甲基化"保护，可以防止菌把质体给分解！ 可以增可转殖的效率！这是我以前的作法，参考参考！ -- wensing (ptt) = eular (kkcity) --

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