作者ctlee (宁静小城)
看板Biotech
标题[问题] Ligation失败(已看过)
时间Thu May 11 11:33:54 2006
请问各位高手
小弟现在要将3kb的PCR product接到一6.4kb的vector的Bgl II上
我先PCR amplify我的fragment
纯化後用Bgl II切再gel purify以去除nonspecific products
至於vector, 我用Bgl II 切完纯化後用CIAP做dephosphorylation
Ligation的时候insert:vector大约维持在5:1的比例
14 C overnight之後 transform到DH5alpha competent cells
奇怪的是,我的control(无insert)没有任何colony
有insert的ligation 做transformation出来所得的clone全是self-ligation
我实在无法解释这个结果,难道insert会促进self-ligation吗
clone这个fragment好几个月了都没什麽进展,拜托各位帮忙了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 128.138.41.88
1F：推 lnyhn:PCR产物直接切通常接不上一般都用TA cloning再转到别的质体씠 05/11 11:53
2F：→ lnyhn:最近也有sticky-end PCR方法..使产务有接点..直接接的方法.. 05/11 11:55
3F：推 allmerit:推楼上 还是先接TA再切吧 05/11 12:27