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标 题Re: [问题] cloning和PCR
发信站批踢踢参 (Sat May 13 07:01:31 2006)
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你的cloning概念怪怪的 (不过我也看不懂这中文叙述 可能是误会导致)
不太确定你知不知道PCR产物不能直接transform
一来是transformation efficiency 太低
二来是transform进去 也没用
所以cloning的顺序是
1. cDNA-pcr
2. Ligate PCR product to a vector->transformation
为什麽不做很多很多次的PCR?
做PCR用的DNA polymerase没有100%准确率
无限"放大" PCR产物的结果 会造成很多变异
产生变异为什麽不好呢?
你作这些PCR产物都有目的 多半是要表现蛋白质
随处有变异的蛋白质->无用
Ligation到其他的vector的目的?
并不只是为了方便送到transformant里面
单单只有一个PCR product有什麽用
当然是要vector上的promoter或是regulatory element binding site
来表现你的PCR产物
把产物放到对的地方 才是cloning的目的
※ 引述《[email protected] (NN )》之铭言：
: 我要把一段cDNA放大..就做pcr
: 然後得出的pcr product
: 然後再把pcr product tranformation到competent cell中,...
: 然後再从competent中抽出vector...再跑序列..看是否有看入..
: 从以上的过程中,我知道competent cell是能把vector放大..也就是把pcr product放大
: 但..为何不直接把pcr product再一次放大成2th pcr product??
: 请问会不会是为了方便pcr product以後若要送再insertion或ligation
: 因旁边有restriction site..才要做cloning...
: 不然就是方便让它能送入cell中..才做cloing..
: ??
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