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标 题Re: [问题] cloning和PCR
发信站批踢踢参 (Sat May 13 07:44:58 2006)
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※ 引述《[email protected] (NN )》之铭言：
: 照大大这样讲...
: 那cloning的主要目的是只有放大pcr product和出错率降低..
: 那请问为何做第二次时,出错率会大增?
举个例子
我用市面上可以proof-read的polymerase
NEB的Phusion好了
error rate 1/4.4x10^7
1th PCR (template=cDNA)
你PCR的序列2kb, 20个cycle
2000x2^19=1x10^9
你的polymerase要新增1x10^9 nucleotides >> 4.4x10^7
如果要算error的话 可能会有23.6个随机错误会产生
我这种算法 并没有累计cycle数
假设变异发生在前几个PCR cycle
你的PCR产物所有的随机错误可能会更多
所以一般人做要cloning的PCR 都会尽量减低PCR cycle数
少加点Mg2+
宁愿少一点产物 也不要有错的产物
照你说的 把第一次PCR产物拿来再amplify一次
不就是把那些随机错误继续以2倍放大..
并且再累计更多polymerase新加的错误
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※ 发信站: 批踢踢参(ptt3.cc)
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