哈....你对我产生误会了... 我当然知道pcr product要坎入载体中...才能transformation 因为我知道我自己乱写一通,,造成你看错..真sorry.. 而我想知道的问题已经解决了 但还是谢谢你..^^ ※ 引述《[email protected] (fly fly fly~)》之铭言： : 你的cloning概念怪怪的 (不过我也看不懂这中文叙述 可能是误会导致) : 不太确定你知不知道PCR产物不能直接transform : 一来是transformation efficiency 太低 : 二来是transform进去 也没用 : 所以cloning的顺序是 : 1. cDNA-pcr : 2. Ligate PCR product to a vector->transformation : 为什麽不做很多很多次的PCR? : 做PCR用的DNA polymerase没有100%准确率 : 无限"放大" PCR产物的结果 会造成很多变异 : 产生变异为什麽不好呢? : 你作这些PCR产物都有目的 多半是要表现蛋白质 : 随处有变异的蛋白质->无用 : Ligation到其他的vector的目的? : 并不只是为了方便送到transformant里面 : 单单只有一个PCR product有什麽用 : 当然是要vector上的promoter或是regulatory element binding site : 来表现你的PCR产物 : 把产物放到对的地方 才是cloning的目的 : ※ 引述《[email protected] (N￾N )》之铭言： : : 我要把一段cDNA放大..就做pcr : : 然後得出的pcr product : : 然後再把pcr product tranformation到competent cell中,... : : 然後再从competent中抽出vector...再跑序列..看是否有看入.. : : 从以上的过程中,我知道competent cell是能把vector放大..也就是把pcr product放大 : : 但..为何不直接把pcr product再一次放大成2th pcr product?? : : 请问会不会是为了方便pcr product以後若要送再insertion或ligation : : 因旁边有restriction site..才要做cloning... : : 不然就是方便让它能送入cell中..才做cloing.. : : ?? --

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