作者lakerjackt (NN )
看板Biotech
标题Re: [问题] cloning和PCR
时间Sun May 14 00:28:05 2006
谢谢大大..因你看不到推文
所以回文谢谢你..
我了解了^^
※ 引述《[email protected] (fly fly fly~)》之铭言：
: ※ 引述《[email protected] (NN )》之铭言：
: : 照大大这样讲...
: : 那cloning的主要目的是只有放大pcr product和出错率降低..
: : 那请问为何做第二次时,出错率会大增?
: 举个例子
: 我用市面上可以proof-read的polymerase
: NEB的Phusion好了
: error rate 1/4.4x10^7
: 1th PCR (template=cDNA)
: 你PCR的序列2kb, 20个cycle
: 2000x2^19=1x10^9
: 你的polymerase要新增1x10^9 nucleotides >> 4.4x10^7
: 如果要算error的话 可能会有23.6个随机错误会产生
: 我这种算法 并没有累计cycle数
: 假设变异发生在前几个PCR cycle
: 你的PCR产物所有的随机错误可能会更多
: 所以一般人做要cloning的PCR 都会尽量减低PCR cycle数
: 少加点Mg2+
: 宁愿少一点产物 也不要有错的产物
: 照你说的 把第一次PCR产物拿来再amplify一次
: 不就是把那些随机错误继续以2倍放大..
: 并且再累计更多polymerase新加的错误
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