作者shunze (毕典End=延毕Start)
看板Biotech
标题Re: [问题]有关cloning 选用的tag
时间Sun May 14 17:14:17 2006
混搭Taq和pfu(或是其他具有proof reading的Taq)
PCR cycle<30
这样做出来的PCR产就兼具正确及A的尾端
跑个电泳 确认产物大小及浓度
若有杂BAND就 回收预计片段 并浓缩
接在专门接PCR产物的载体即可(ex pGEM-T, pCRII-TOPO)
我比较偏好後者 因为时间只需5分钟左右 室温下即可完成
※ 引述《winjj (小深蓝)》之铭言：
: 是Taq 不是Tag
: taq类都没有proof reading 的功能
: 有proof reading功能的是pfu
: 但是pfu没有会在PCR产物末端加上A的特性
: A要自己另外加上去
: 通常用taq类的话, 就是接上去後在定序确认啦
: ※ 引述《[email protected] (MIMIMOMO毛毛和我)》之铭言：
: : 我是大学部菜鸟
: : 因为前一阵子用plantium tag、Extag做PCR得到我的产物
: : 与p-blue、PGEMT ligation
: : 但是蓝白筛的结果白色菌落都没有得到insert
: : 总共重复做了数十次依样没有结果
: : 现在boss叫我用violet试试看(我的vector是PGEMT easy vector)
: : 但是violet不是没有proof reading的功能吗
: : 这样该如何做转殖
: : 我有查过相关资讯，应该是如果insert有接近去後
: : 得到定序结果
: : 只有功能性的序列没有问题就可以转殖
: : 但是要如何确定他哪些是功能性的序列
: : 请教各位老手了~~
: : 感恩喔
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天是蓝的
宇宙也是蓝的
在这广大的天地中
谁能扞卫自己的明天
看着旭日东昇
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.136.25.176
1F：推 oplz:topo vector 很贵.... 05/15 03:09
2F：推 shunze:还好吧！只有买载体的话 20rxn约5000元 05/15 20:16
3F：推 bystander945:都已经重复数十次了 应该没差这点钱吧!? 05/16 06:08
4F：推 oplz:我觉得普通的反应用到 topo-vector 真的是浪费钱.... 05/16 13:26
5F：推 interleukin:我也绝得用topo太浪费 钱不是这样浪费的 05/17 01:28
6F：推 shunze:研究都是赶时间的...尤其挑选基因时效率比较重要 05/17 16:26