作者hchingling (星光)
站内Biotech
标题[问题] PCR question
时间Mon May 22 20:33:03 2006
hi hi
之前post这请教各位有关萃DNA的问题 後来我的DNA OD260/OD280 皆
在 ≧1.8以上 也就是DNA/RNA 的纯度够高了
因此我已经确定了 萃DNA这步骤应该是没有问题了
接着跑 pcr 问题也都可以解决了 也没有再看到smear的问题了
但是 套在其它的细菌就又出现smear （DNA纯度1.8以上）
我开始怀疑是不是primer 的问题
但如果是引子的问题 应该不会有的菌不会出现smear 有的菌却出现了
我的primer 的浓度是5μM 取1λ 总体积是50λ
DNA 是 10μg/ml 取 1λ总体积是50λ
anneling 55℃ 30 cycle
Taq 是 Protech
麻烦各位熟悉PCR的前辈 给我建议
感激不尽（快被鬼DNA搞死的阿呆鬼~~~~呜)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.117.91.148
1F：推 shunze:试试gradient PCR 寻找黏合最佳温度 05/23 18:25
2F：推 pj0611:没错...有可能是annealing temp不是最适温度...提高一点试렠 05/26 17:06