作者littlebu (LittleBU)
看板Biotech
标题[问题] 请教关於RT-PCR的几个问题
时间Mon May 22 23:25:04 2006
1. 我看Promega Oligo-dT的说明上写它是18个T的Primer
请问这种Oligo-dT跟自己请厂商合成18个T会有什麽差异？
会比较好用？还是没什麽差？
请问有LAB是请厂商合成18个T来用吗？
2. 请问抽完RNA後的吸光值质量都不错，结果转出cDNA没有成功
这样是代表mRNA占的比例太少？还是mRNA被破坏？还是其他可能原因？
因为还没有跑RNA GEL，所以都只能猜测
3. 请问一般实验室转cDNA是取多少量的RNA? 我们是 2ug -> 20ul cDNA
请大家指点迷津，谢谢 TT
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 219.87.224.176
1F：→ littlebu:另外如果Negative有band, cDNA却没有,又是什麽情形 Orz.. 05/22 23:27
2F：→ apa9394:bp是多大... 05/23 10:59
3F：→ littlebu:跟产物一样在194的位置，应该也不是primer乱接的 05/23 14:27
4F：推 betrayme:RNA没有跑胶确定品质的话就有可能是RNA的问题了 05/23 22:49
5F：→ betrayme:一般都是5ug 的 RNA -----> 20ul cDNA (RT kit 上有建议) 05/23 22:51
6F：推 littlebu:可惜我的RNA浓度不高,2ug都要靠浓缩了, 谢谢您的建议 05/23 23:53