作者littlebu (LittleBU)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请教关於RT-PCR的几个问题
时间Wed May 24 00:02:15 2006
※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言：
: ※ 引述《littlebu (LittleBU)》之铭言：
: 没有(不过得先加oligo-dT进行annealing)
我的步骤是Oligo-dT 1ul + dNTP 1ul +
RNA + Nuclease-free 11ul -> 65'C, 5min
回冰上之後再加上
Inhibitor, SSIII, DTT各1ul + Buffer 4ul
: 尽量不要，浓度不够
: 若为定量实验，那就用1 micro-gram做，不会怎麽样
: 建议不要，若要浓缩何不当初以DEPC water溶RNA时体积减少?
: RNA不比DNA，他是非常脆弱的
我用的是Promega的Isolation Kit
他最後是用Nuclease-free water 100ul去把column membrane的RNA溶下来
所以不像Trizol的方式可以自己调整体积
我会试试看体积减量的状况下能不能把RNA溶下来
再次谢谢您～
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 219.87.224.176
1F：推 blence:dNTP应该也是自己配的罗？ 浓度如何呢 05/24 00:29
2F：推 littlebu:dNTP是买的 10mM 05/24 08:49
3F：推 mandible:个人觉得应该是RT的过程有错! 05/31 23:36