作者linzhengzhan (研究所：硕士班vs博士班)
看板Biotech
标题Re: [问题] 剪切活性问题
时间Wed May 24 12:00:26 2006
※ 引述《rudyrudy (我爱梁朝伟)》之铭言：
: 不好意思 问一个小问题 麻烦大家了
: 假设pGLO长5.4kb，lambda DNA长48.6kb，由下列减量测试数据，推算HindⅢ活性。
: (50-80%)
: a. 测试之pGLO之总量为1μg。
: b. 37°C切1小时，最佳Buffer配方
: c. HindⅢ原浓度为10 u/μl，使用量为1μl。
: d. 2X稀释可完全剪切，但3X稀释则开始有未切片段。
: 谢谢谢谢
NEB 对HindIII的unit definition为
１U 的HindIII，对１ug的λ-DNA可以切的完全，在37℃，反应体积遵为50ul。
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请参阅enzyme manual。
而λ-DNA上有7个HindIII的切点。 ref：NEB 2005.06 catalog p.293
1bp的average M.W.为650 Da
所以，要将之转到莫耳数 (mole, 这才是真正的分子数量)，再数到unit上
=> λ-DNA：48,502bp
10^-6 10^-6
----------- * 7： 1 = ------------ * 1： X
48502*650 5,400*650
解释：
10^-6的λ-DNA被切7刀，为一个unit；依比例而言，10^-6次的pGLO DNA (假设只切一刀)
需 X unit(s)。
就可以算出最适量的unit，再视情况，调整到所需要的倍数。
至於enzyme reaction buffer，请参阅NEB 2005.06 catalog 或是 其他厂商的catalog
ps. HindIII (NEB) reaction buffer 为 NEB buffer 2。
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