※ 引述《nothingelse (上邪)》之铭言： : 在设计primer的时候 : 原本是follow paper的设计 : 有先以传统PCR test condition : 看起来是major band : 结果Q-PCR跑出来 (使用Roche lightcycler) : melting analysis可以看到三个peak (一般应该是要单一peak) : 而且温度都是80几度以上 应该不是普通的primer dimer : 更神奇的是连H20 negative control都有这样的pattern且萤光也随时间增加 : 看起来似乎是primer不够specific : 且primer或是H2O可能有contamination : 不过我重新解冻primer结果还是一样 : 相对的HPRT的结果下H20就没有signal 萤光都很低 : 且sample也是只有single peak : 怀疑可能是primer specificity真的太低了 (三个peak....orz) : 或是primer之间形成了dimer或是更多的...(tetramer??) : 後来上Roche公司提供的primer网站重新设计 : 结果他显示没有perfect或是good的primer : 只有less than good的...不知道到底可不可以用 : 重新设计或是用其他的软体predict : 结果找到的似乎也难以避免会有primer dimer的形成 >"< : 不知道板上有没有遇过这种难缠的gene : 最後是怎麽解决的 @@ : ps.primer dimer的prediction如果有四个mer会互相作用 算是严重的吗?? 一般来说 我跑realtime pcr比较少去设计primer 都是去找PAPER 用他们用过的primer 或是来这边找 http://medgen.ugent.be/rtprimerdb/search_primers.php real time pcr primer的database 试试看有没你要的吧 -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... --

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