我看到你的问题直觉反应觉得应该从两方面来改善。 第一，固定的方法。 第二，GFP 的挑选。 为了验证我的想法，我查 google 的结果，给你做个参考。 关键字：GFP、ethanol 一、固定的方法部份 这里有相关的解决办法，是从固定的方法着手。 http://www.cyto.purdue.edu/hmarchiv/1997/0536.htm 摘要如下： Cells were fixed in 0.25% paraformaldehyde for 5 minutes Wash in PBS Fix in cold 70% Ethanol for 30 minutes Wash in PBS x3 RNase (100ug/ml, 10 mins RT), then 50ug/ml PI 二、GFP 的挑选部份 另外有一个网页是讲从 GFP 本身着手，原本网页已经失连 ，google 有存档，如下： Simultaneous Analysis of GFP and CELL CYCLE http://0rz.net/a31o8 内文提到可以使用 transmembrane 的 GFP 可以改善在 PI 染色下 GFP 被酒精 破坏的现象。相关论文如以下两篇： Kalejta RF, Shenk T and Beavis AJ. (1997) Use of a Membrane-Localized Green Fluorescent Protein Allows Simultaneous Analysis of Transfected Cells and Cell Cycle Analysis by Flow Cytometry. Cytometry, 29:286-291. Kalejta RF, Brideau AD, Banfield BW and Beavis AJ. (1999) An integral membrane green fluorescent protein marker, Us9-GFP, is quantitatively retained in cells during propidium iodide-based cell cycle analysis by flow cytometry. Exp. Cell Res. 248:322-328. 实际商品部分可能要自己去问问看。 ※ 引述《stonegirl (Girls, be ambitious)》之铭言： : 我的细胞会表现EGFP 因为我染PI(propidium iodide)想要看cell cycle : 希望看得是有表现EGFP的细胞 : 我原本是照PI的protocol利用EtOH固定 结果跑flow时完全侦测不到EGFP : 跟学长讨论的结论是可能酒精会影响EGFP表现 : 想问问各位前辈们 我要做PI染色可以用paraformaldehyde固定吗？ 此段回答如上。 : 另外我想再问关於flow的问题 : 我们学校那台flow共有三个滤片 FL1 FL2 FL3 : 看EGFP是用FL1 我查了一下emission在508nm : 看PI 用FL3 PI emission在620nm 但是PI + DNA 约在514nm : 那这两个会不会影响到呢？ 需不需要做互补？ : 很多问题.......麻烦大家了 关於滤镜的问题，我想你是在说 sideward scatter 的部份。 这牵涉到你们家的 flow 其滤镜的规格，如滤过的波长是多少 是 LP (long pass) 还是 BP (band pass) 之类的问题。 我想你自己会比我们还清楚一些。 在此推荐一个网站，滤片的原理与选择，molecular probe 做得相当好。 (现在为 invitrogen 子公司) 以下为简要说明与连结： 萤光原理教学 flash 分别有萤光原理简介、光谱与光源和滤镜三个部份。 http://probes.invitrogen.com/resources/education/ 另外一个 Fluorescence Spectraviewer 有提供目前实验上常用到的染剂的激发光与放射光波长与波峰图形的资料。 不同种类染剂在不同滤镜组合之下 overlap 的问题很容易可以看得出来。 http://probes.invitrogen.com/resources/spectraviewer/ 希望有帮得上忙 :) --

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