作者aggaci (有气质的台客)
看板Biotech
标题请问大片段的RT-PCR
时间Thu Jun 8 01:07:12 2006
请问一下 最近想钓几个基因出来作表现
3个基因PCR出来的片段大小约为1.5 kb
本来用construct的primer去夹 没夹到(位置不对,差太多)
後来再往外设计primer想做nested PCR
怪的是...那个位置也没有我想要的band!
这....看了一下他们序列,发现GC比例还不少
明天会加DMSO或formamide试试看..............
想请教大家,有没有什麽原因会导致PCR没有产物?
(是primer dimer的原因吗?发现我的primer dimer似乎还不少)
以下是我的条件
95度 30s
60度 30s
72度 100s
35 cycle
p.s
1.cDNA quality不好的原因已去除,因为这是别人给我的cDNA
他已经检查过了
2.我非常确定这个细胞有表现这几个基因
唉 第一次做RT-PCR感受到这麽强大的无力感
难怪有人说RT-PCR是最困难的技术,因为他太简单了
简单到发生问题不知道问题出在哪
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http://0rz.net/da0PG 我的相簿....
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◆ From: 140.114.100.165
※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (06/08 01:08)
1F:推 meiosisLin:你的CG值有多高?and DMSO加的比率? 06/08 02:24
2F:推 oxoox:如果你的gc值高 应该把前面两个时间加长到一分钟以上 06/08 21:52