作者linzhengzhan (研究所:硕士班vs博士班)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问western blot抗体是否能够再使用?
时间Fri Jun 9 06:47:27 2006
※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言:
: ※ 引述《[email protected] (储备博士)》之铭言:
: > 因为老板一直吵着实验很浪费...要我尽可能减少抗体使用量,
: > 或是重复使用一级与二级抗体;但是我之前曾尝试过,
: > 发现有的一级抗体根本无法重复使用...想请教各位,
: > 是不是有更好的稀释溶液还是理想的储存方法,
: > 可以让抗体重复在western中使用?感激......
: 的确是 case by case 吧
: 基本上 一抗用 5% NGS + 3% BSA + 0.?% tween 20 + 0.0?% Azide
: 可以就是可以 不行就...
: 二抗基本上是不推荐重复用
: 要省二抗 可以考虑改用比较敏感的发光剂
: 另外我记得 labvision 有出一种抗体的稀释液
: 号称稀释到 working 浓度的抗体可以室温保存数个月
: 价钱也不贵
之前,实验室老板跟原先的博班老板A primary antibody,因为少,所以reuse,
原来保存在PBST (或是TBST)中;之後在Hybird 1°b.时,就出现了一些不该有的pattern
。(事实上,之前在用其他的1°Ab.,不会有这种情况)
之後,保存在Blocking solution (1% BSA in 1X PBS, contain 0.2% sodium
azoid),就不会有这种情况了。只是这样子,感觉上比较浪费,但是可以一直重覆使用,
到Ab.的titer没有为止……
(这是老板说的,我到目前为止还没有用到titer没有的情况!)
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Blocking solution,BSA vs. non-fat milk
BSA win!
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