※ 引述《wensing (潜力股)》之铭言： : 各位先进，小弟初次接触用E. coli表现蛋白！ : 我采用的是M15[pREP4]与pQE1，37℃，150rpm，1mMIPTG(最终) : 我的蛋白质是20KDa : 现在我是将诱导後(4hr)的菌液，取 100μL 离心 去上清液 : 直接再加入sample buffer (β-me)(有加热处理)，然後直接跑SDS电泳。 : 可是在电泳图上看不到我的产物位置 (我有对照组) 有可能没有生成 不知你的protein对细菌有没有伤害 induction条件下 细菌的生长会稍慢 可是如果很慢的话 可能就有问题 你用的vector (我没查)应该不是secrete的吧 : 但我有观察well到上有一层薄薄的白色沉淀物 : 我想问： : 1. 那一层白色的东西是什麽？ 会是我的产物(都变成inclusion body)吗？ 应该细胞的碎片 : 2. inclusion body 加入sample buffer处理後直接跑胶片 : 这样子会看到得band吗？也就是sds可完全部破坏inclusion body？ 可以, Sample buffer中的SDS 2-ME可以将inclusion body溶掉 : 3. M15[pREP4]与质体pQE1均会产生抑制子，1mM IPTG这样子浓度够吗？ : 还是太多？(我是照着手册上培养方式)。 这部分可能试了才知道 每个protein的状态都不大一样 : 4. 若万一都是inclusion body，是否我要改变培养温度(低温培养)会比较好？ 温度 IPTG 时间 菌浓度 plasmid/host种类 都有paper提过 我个人没有成功把inclusion body变成soluble protein的经验 --

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