作者timbrian (perk yourself up)
看板Biotech
标题Re: 请问怎麽把蛋白质从PAGE上elute出来?
时间Wed Jun 28 21:42:48 2006
※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言:
: 除了用电极的方法 以及买kit...
: 有没有其他的方法呢?
: 我是跑native PAGE再把想要的band挖出来跑sds-page...
: 谢谢
虽说你说不要用电极.. 但还是提供一个用电极且省钱的
我们实验室有 electroelutor.各家的都很难用 又贵(当初我试过三大厂牌 都不及格)..
另一个方法是将胶切下来 包在透析膜里 丢到水平电泳槽 把蛋白质电出来
那你怎知蛋白质被电出来了没?..
简单.. 准备一个透析膜 里面包经过 CBG-R or G 染色的 band
(随便找个load个蛋白质跑 SDS PAGE 跑完染胶後切下来)
这个 control 组与你的 target protein 两包透析膜一起丢到水平电泳槽一起电
这当成 control 如果蛋白质被电出来了 这个control 组的颜色就会变淡
(蓝色被电出来)
你的蛋白质就可以收了.. 透析膜刚拿出来不需打开 直接透析浓缩 蛋白质就出来了
电极方向也不需太担心 即便因为是 native PAGE 蛋白质带电荷不同 跑反了
你的蛋白质仍是被限制在透析膜跑不出来
活性都好好的..
这方法比买又贵又难用的 electoelutor..
或是用超音波震 回收率都没太糟..
这方法注意两个重点..
buffer 要适当
再来是透析膜绑好.没绑好被电出去我也没办法
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.64.75
1F:推 ROKEE:你确定吗?用CBR染完以後蛋白会被定在PAGE内,没染的比较快出ꠠ 06/28 21:52
2F:→ ROKEE:可惜bluetank停产了,不然很大推这个.... 06/28 21:53