※ 引述《timbrian (perk yourself up)》之铭言： : ※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言： : : 除了用电极的方法 以及买kit... : : 有没有其他的方法呢? : : 我是跑native PAGE再把想要的band挖出来跑sds-page... : : 谢谢 : 虽说你说不要用电极.. 但还是提供一个用电极且省钱的 : 我们实验室有 electroelutor.各家的都很难用 又贵(当初我试过三大厂牌 都不及格).. : 另一个方法是将胶切下来 包在透析膜里 丢到水平电泳槽 把蛋白质电出来 : 那你怎知蛋白质被电出来了没?.. : 简单.. 准备一个透析膜 里面包经过 CBG-R or G 染色的 band : (随便找个load个蛋白质跑 SDS PAGE 跑完染胶後切下来) 不建议用CBR染色 蛋白会被fix在胶里面 推荐用冰的0.25M KCl 挖白色的band，记得一定要用冰的! : 这个 control 组与你的 target protein 两包透析膜一起丢到水平电泳槽一起电 : 这当成 control 如果蛋白质被电出来了 这个control 组的颜色就会变淡 : (蓝色被电出来) : 你的蛋白质就可以收了.. 透析膜刚拿出来不需打开 直接透析浓缩 蛋白质就出来了 : 电极方向也不需太担心 即便因为是 native PAGE 蛋白质带电荷不同 跑反了 : 你的蛋白质仍是被限制在透析膜跑不出来 : 活性都好好的.. : 这方法比买又贵又难用的 electoelutor.. : 或是用超音波震 回收率都没太糟.. : 这方法注意两个重点.. : buffer 要适当 pI>7 用CAPS pI<7 用1xTAE : 再来是透析膜绑好.没绑好被电出去我也没办法 其实原po的a兄没讲实验目的大家也很难帮您想办法阿 :~~~ --

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