※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之铭言： : ※ 引述《timbrian (perk yourself up)》之铭言： : : 虽说你说不要用电极.. 但还是提供一个用电极且省钱的 : : 我们实验室有 electroelutor.各家的都很难用 又贵(当初我试过三大厂牌 都不及格).. : : 另一个方法是将胶切下来 包在透析膜里 丢到水平电泳槽 把蛋白质电出来 : : 那你怎知蛋白质被电出来了没?.. : : 简单.. 准备一个透析膜 里面包经过 CBG-R or G 染色的 band : : (随便找个load个蛋白质跑 SDS PAGE 跑完染胶後切下来) : 不建议用CBR染色 蛋白会被fix在胶里面 : 推荐用冰的0.25M KCl : 挖白色的band，记得一定要用冰的! 白色???是透明还是白色? 为什麽得用冰的哩? : : 这个 control 组与你的 target protein 两包透析膜一起丢到水平电泳槽一起电 : : 这当成 control 如果蛋白质被电出来了 这个control 组的颜色就会变淡 : : (蓝色被电出来) : : 你的蛋白质就可以收了.. 透析膜刚拿出来不需打开 直接透析浓缩 蛋白质就出来了 : : 电极方向也不需太担心 即便因为是 native PAGE 蛋白质带电荷不同 跑反了 : : 你的蛋白质仍是被限制在透析膜跑不出来 : : 活性都好好的.. : : 这方法比买又贵又难用的 electoelutor.. : : 或是用超音波震 回收率都没太糟.. : : 这方法注意两个重点.. : : buffer 要适当 : pI>7 用CAPS : pI<7 用1xTAE 这个..............不知道多少哩 他应该是个complex : : 再来是透析膜绑好.没绑好被电出去我也没办法 : 其实原po的a兄没讲实验目的大家也很难帮您想办法阿 :~~~ 歹势 我讲一下实验流程好了 我有一段oligonucleotide 其中5端lebel FITC 拿去做EMSA 我预期可以看的到shift(isotope有，paper也有人这麽做) 再把shift挖下来跑sds-PAGE 将里面的蛋白质分开 以方便做western blot或是MS/MS分析 -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... 兴趣:做实验、看PAPER、玩音响、听音乐、养枫叶鼠、弹钢琴 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165 ※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (06/28 22:08)