※ 引述《KECCO (谁帮我保养车子~)》之铭言： : 我最近从cell extract membrane protein後~ : 利用western blotting去侦测.... : 因为我的membrane protein是一个glycoprotein~ : 另外 : 又因为是membrane protien~所以比较hydrophobic~~ : 我怎麽跑胶~怎麽transfer~ : ""band""都是糊的....band都很胖.... : 有人 有什麽小撇步吗?! : 加什麽特别的detergent会好点吗?! : 恳请大家帮忙!! 我以前做的题目是transmembrane receptor protein(但不知有没有被glyco就是了). 在做western blotting的过程中, 并没有遇过像您这样的问题. 通常收cell lysate时, 一些detergent如NP-40, tritonX-100, 都足够把cell membrane 上的lipid 从 membrane protein 上头分开, 而在denature ( 加sample buffer 去煮) 时, protein应该都 unfold, 不会有hydrophobic的问题. 至於glyco的东西, 我就不清楚 了. 请问您收细胞的方法跟reagent为何? 用同样的步骤方法跟reagent去看其他的蛋白质(不 一定要membrane protein), 也会在Western blotting 上头看到糊糊的Band吗 我有时会在Western Blotting有这样糊糊的band, 通常是因为一时晃神, 把buffer 搞混了. 不过你说band很胖, 会不会是protein loading 得太多了? --

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