※ 引述《[email protected] (realm)》之铭言： : 这是我第一次做蛋白质表现... : 我的是带有his-tag的蛋白质...於E. coli中表现... : 用Ni-NTA进行纯化... : 目前的问题是...我怀疑是因为表现量太高...所以我的蛋白在pellet的部分... 有时候不是表现量高低的问题 : 就我所知, 透过调整培养条件等等...可以将pellet的蛋白变成在supernatant中... : 我之前的条件...37度, 0.5 mM IPTG, 6小时 : 我在想...将温度改成30度...减少IPTG的量...不过不知道该减少到多少... : induction的时间是否需要调整... 低温 16度 shake 慢一点 50rpm IPTG浓度低一点 0.1mM 菌养老一点再induction 加ethanol去诱导HSP产生帮助folding fusion another tag, such as MBP, GST, Nus : 因此想请教有相关经验的大大~~能否提供一些经验分享~~ : ...另外想问我的观念是否正确... : 之所以可以将pellet中的蛋白变到supernatant中... : 主要是因为透过培养条件的调整, 使蛋白的表现量下降... : 这样的观念对吗?? : 先谢过~~:) 不完全对 以上有些条件是让菌长慢一点，藉以让她产生蛋白质时慢慢地做出来 不过有些对Ecoli来说是有毒的蛋白质 不管怎麽做都是inclusion body -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... 兴趣:做实验、看PAPER、玩音响、听音乐、养枫叶鼠、弹钢琴 --

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