作者fjubiology (Science阅读俱乐部)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问电泳的Dye
时间Wed Jul 5 15:01:37 2006
※ 引述《satantaco (TACO)》之铭言:
: 最近有一个问题
: 状况是这样的
: 通常跑agarose gel的时候
: sample要先与dye混合然後再load入well里
: 那譬如我的Dye是6X的
: 也就是sample以5ul而Dye是1ul混合成6X
: 但是有时候sample很珍贵只以2ul做分析
: 会以2ul的sample混合1ul的Dye然後以TAE buffer补满到6ul
: 或者是2ul的sample混合0.4ul的Dye
: 我的问题在於电泳槽里的Buffer也是TAE buffer
: 那我能不能以1ul的Dye加上2ul的sample混合後就loading
: 因为电泳槽里的Buffer应该在加入的同时就会混合了
: 但是这样我的同学认为这样一开始的比例就不对
: 所以想问问看板上的大大觉得是否也是一定要补满到6ul才loading
不一定要补,只要你的loading dye足以让DNA完全下沉於well底部不会漂浮
其实我的想法很简单,loading dye是拿作什麽的?
让DNA完全下沉於well底部不会漂浮
我会这麽想的原因很简单,agarose gel电泳的结果会让同样大小的片段位在同一个
部位(前提是只有一个构形)
DNA的亮度我们都是染EtBr,而DNA的亮度是跟EtBr的插入成正比
也就是说Base越多插入的EtBr越多,DNA的亮度越亮
所以那如果N倍的dye拿来混合小於N体积的DNA的亮度跟你补水或buffer亮度应该是相
同的
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织田信长:「杜鹃不叫,我杀了牠!」
丰臣秀吉:「杜鹃不叫,我想办法让牠叫!」
德川家康:「杜鹃不叫,我等牠叫!」
Angus Tzeng:「杜鹃不叫,我自己叫!XD」
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
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※ 编辑: fjubiology 来自: 140.136.180.230 (07/05 15:06)
1F:推 satantaco:嗯嗯感谢大大解答 07/06 09:41