作者bluestanley (好想吃苹果...)
看板Biotech
标题[问题] RT-PCR for Full lenth cDNA
时间Sat Jul 8 20:29:38 2006
最近要P约3000bps的一段full lenth cDNA
因为primer没得选择只能用ORF的头尾两段
厂商送来的Primer Tm值差了约5度左右 (61度&56度 G/C约50%)
但是一直P不出来 快要发疯了
想请问一下各位高手 P大片段DNA时所用的condition是怎样呢?
或者有什麽要注意的地方呢?
谢谢大家指教 ^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.70.51.143
1F：推 ROKEE:偷问一下，我要做inverse PCR，夹10kb的self-ligate DNA 07/09 00:47
2F：→ ROKEE:版上有高人可以指点一下吗?@_@ 失败很多次了 /_\~~ 07/09 00:48
3F：推 melodyrabbit:你的template用的是什麽library?还有你试过什麽条件ꤠ 07/10 00:52
4F：推 pj0611:我也觉得你把条件列出来会比较好...关於primer可以自己设计 07/10 15:52