※ 引述《biolenz (冷次)》之铭言： : ※ 引述《GLNVA (自游自在)》之铭言： : : 喝 我们实验室也是碰过这问题，我硕一的时候怎麽作怎麽美，到了硕二不知道怎麽了 : : 赶data它拼命就给我漏，漏的挺严重的！我也用过paraffin，也换过新的玻璃(Bio-Rad : : 原厂的喔)都没办法撑很久，後来找厂商来， : 我也是用 Bio-Rad 的，型号 Mini PROTEAN 3 cell (小片胶) : 我觉得架子跟玻璃还有垫子应该都没什麽问题 (那两片灰色的垫子要一两千XDD) : 因为漏胶的那组用一样的东西重作会 ok，而且漏胶是有时候会漏，有时候 : 不会，我在想是不是是胶本身的问题，前面有板友提到 load 水进去不会漏 : ，load 胶偏会漏 (明明胶就比水还黏稠，没道理阿)。 : 因为漏的情形大部分是配 separating gel 的时候，用 isobutanol 压会有 : 一边垮下去，看起来好像是漏掉了，可是看那个垫子又没有东西漏出来的样 : 子。有没有可能是胶凝固的不均匀所导致的呢？(大片的胶尤其容易这样) : 我之後把胶配好在 load 胶前一定会把他搅拌均匀 (可以用个烧杯放 stirr) : 这样子看起来漏胶的情形就少了许多。 : 不过我也不确定就是了，有时候运气好怎麽乱作的胶都好好的，有时候运气背 : 做出来的胶就鸟掉.....orz 有没有考虑用最原始的方法? 看了版友们的回文 发现大家都是用铸胶模 所以都会有型号的问题产生 况且有些海绵啊 胶垫啊 好像过一段时间就会坏掉的样子 我老板因为觉得铸胶模不好用 所以我们实验室都用比较克难的方法 提供给你参考一下 首先把spacer跟两片玻璃摆好 然後下面贴胶带 胶带要贴在玻璃上 贴的紮实一点 相同的 spacer的两侧也要贴 一样也是贴的紮实一点 注意胶带要用宽的那一种 不要用细的 全部贴完以後 用长尾夹夹起来 摆个一个小时以上 让胶带上面的有机溶剂挥发 这样水才不会破坏胶带的黏性 这样一来应该是不会漏 我现在这样做胶 load进去多少就凝固多少 上面用水去压会比较快凝固 如果真的担心会漏的话 那麽胶带就只黏下面就好 然後用浓度低的agarose 大概load个300-200ul 让agarose均匀的分布在底部 这样就可以了 不过这样一来的话 可能会有一些agarose渗到spacer 跟 玻璃的中间 造成有些well可能会渗 如果用卡马西 blue染的话就没有什麽差 但是要是做western的话 可能就会影响到 如果上述的方法都还是会漏的话 那麽还有几招 我老板教的...... 1. 改运吧 可能是八字太轻 会做不出来 要不然就...... 2. 拿着你的pipetman 用20P的就好了 装满着TEMED 看到哪里漏就给他滴下去..... 老板说这是不传密技 请各位别声张出去 拜托XD 他上个礼拜教我的 我用过一次 真是好用 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.32.9 ※ 编辑: Bluecold 来自: 140.109.32.9 (07/09 15:52)