※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言： : ※ 引述《CErline (草螟仔弄鸡公)》之铭言： : : 这样解释不知道对不对…… : : PCR 要定量不是只跑胶看它的亮度， : : 应该要一起跑一个 house keeping gene然後再去比copy number : : 如果只是跑个胶让 a和 b两个 band比表现量，大概都只能算半定量…… : 不对 : semi-quantitative RT-PCR 是必须将已知浓度的template等倍数稀释 : 分别去跑PCR，依照强弱作出一条检量线 : 再以内差法算出未知样品的量 : 但是说的倒简单，PCR有saturation的问题 : semi-quantitative RT-PCR仍然没办法解决，所以很少人用此方法 恐怕刚好跟你说的相反喔~ 绝对定量(absolute quantitation)要先用已知浓度的相同东西做出一条standard curve (如果要测total RNA,就用已知浓度的total RNA做standard curve) 利用内插法求你的sample浓度 当然,PCR本身的一些细节条件如saturation的事情就不在这里讨论 至於半定量(semi-quantitation)则是利用一个大家都有,而且量差不多的东西 (像是house keeping gene)当作分母一样的东西 在相同反应条件下,每一个sample都跟分母比後再做比较 你如果要问quantitative PCR,不知道是不是要问real-time quantitative PCR? 如果是的话,基本上它也分成absolute/semi quantitative 只是侦测的方式跟传统run gel的方式不一样, 它可以侦测到PCR的gerometric phase,这是PCR当中最符合y=2^n的时期 所以可以避开saturation的问题 --

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