作者iceye (电子秤)
看板Biotech
标题Re: CHIP assay
时间Fri Jul 28 16:17:58 2006
※ 引述《haveacat (有只猫)》之铭言：
: 最近在做CHIP assay (chromatin immunoprecipitation assay)
: negative组别 我是不加抗体 所以正常是沉淀不下DNA
: 但是最後利用PCR侦测 却一直夹出DNA片段 其他别组加抗体的也有夹出片段
: 只是negative一直无法很乾净 wash buffer用 TSE-500*3 LiCl*1 TE*3去洗
: 是否其他人有经验 如何降低non-specific binding
: PS: sonication後 DNA片段已到200-1000bp间了
: 我也照protocal加agarose beads时 混入salmon sperm DNA和BSA
: 难道还有其它小技巧吗
: 帮帮解个惑吧????/ 谢谢
我是照protocal上面 sonication完细胞後 离心
先加入Agarose G+A (含有salmon sperm DNA和BSA) 先pre-clear
再加入抗体 以及 一组未加抗体negative control 进行实验
之後再加入 入Agarose G或A (这里也同样含salmon sperm DNA和BSA) 进行沉淀
但是最後negative control 还是很容易PCR出片段来
然倒是在wash过程不乾净 但是buf 高盐 以及LiCl 和TE我都洗过了
很困扰
PS:这是学弟ID 我是原PO
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我想 我是幸福的
有个值得我思念的人 思念我
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.67
1F：推 Helene:"Agarose G或A (这里也同样含salmon sperm DNA和BSA)" 07/29 14:42
2F：→ Helene:是说你把这些一起加到Sup去？ 07/29 14:42
3F：→ Helene:还是说agarose preincubated with BSA and sperm DNA? 07/29 14:44