作者mikoyan (mikoyan)
看板Biotech
标题[问题] 新手问 Real Time-PCR ~
时间Sat Jul 29 19:16:13 2006
各位学长姊,
刚刚上课学习如何分析 Real Time-PCR 的图, 产生了不少疑惑.....
请各位学长姊协助我厘清一些观念～
简单介绍我们练习的材料:
Nanog gene, Forward & Reverse Primers, TaqMAN, SYBR I.
以下是我的疑惑...
1. 为什麽要到了 30 ~ 40 cycles 才会出现 ct 值 ?
而不是一开始前几个 cycle 就有 ct 值的出现 ?
2. 30th cycle 前, threshold line 以下就已经有萤光讯号了,
为什麽这些不是有效的 PCR 讯号 ?
而要等到 30~40th cycle 以後才会出现具有代表性的讯号 ?
我个人的想法是:
这些不具代表性的讯号可能来自於 primer dimers 和 quencher-reporter dye probes
之间作用所产生的讯号....
以上是我对第二个疑惑的想法, 第一个.... 我还在厘清中......... >"<~
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1F：推 aggaci:Ct value介於15~30间比较可信 07/29 20:34
2F：推 mikoyan:多谢您的分享, 这个范围有什麽特别意义吗 ? 07/29 20:52