作者ghjkl (石石石)
看板Biotech
标题Re: [问题] 关於ＭＴＴ之後的溶解步骤
时间Thu Aug 3 01:48:09 2006
※ 引述《aDnEgVeIlL (观察者)》之铭言：
: 我们做生医材料，是用ＤＭＳＯ泡的，所以ＭＴＴ是用ＩＰＡ去溶，
: 步骤是不除掉MEDIUM，加5% MTT 100u，CO2培养3～5小时，小心除调MEDIUM後，
: 加IPA 200u，再取100u用ELISA读吸光....
: 请问IPA这个步骤的量，能够调低一点吗？目前感觉溶剂太多，结果ELISA的读值和
: 背景值很接近，这样很容易被背景干扰，请问我该怎麽调整，大家又是怎麽调的呢？
你的实验步骤好像有点问题
就我的认知跟自己做MTT的实验来说
MTT都是泡在培养液中
因为MTT在培养液中放太久会氧化而提高背景值所以现泡现用
改良方案是高浓度5或10mg/ml泡在PBS中4度C或-20保存
使用时再用培养液5倍或10倍稀释使用
就不会有这问题
反应完毕最後才用有机溶剂把紫色结晶溶解出来
不过MTT在有机溶剂的溶解度还蛮高的
所以若您要照原本的实验步骤的话
改良方法应该是把IPA的MTT浓度再配个10倍以上吧
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