作者aggaci (Desperado)
看板Biotech
标题Re: protein无法induce
时间Sat Aug 5 15:14:01 2006
※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之铭言：
: ※ 引述《[email protected] (加油加油！！)》之铭言：
: : 我使用pGEX-KG来产GST fusion protein
: : sequence出来的结果是正确的
: : 但是在SDS-PAGE上没有IPTG induction的痕迹
: : 不死心的用western blotting check
: : 可以侦测到GST和我的protein的signal
: : 有没有人知道为什麽
: : 要怎麽解决?
: : 拜托知道的人解答一下 感激不尽!!
: 借标题用一下
: 想问一下版上的高手们
: 大家如果用pGEX系统做蛋白表现时
: 会用 bead 还是 column 纯化呢?
: (ex:Glutathione sepharose 4B vs GSTrap FF)
: 又，如果要去掉fusion上的GST
: 假如用thrombin切除後，会再利用什麽方式针对target protein做分离?
: (gel filtration column? Benzamidine column? or...some else?)
"on column digestion"
可以有效分离你的蛋白和GST...
但是protease的量需要较多
不过前提是要能切....
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
1F：推 ROKEE:这...也要买酵素来切了以後才可以知道吗? /_\~ 08/05 16:10
2F：推 aggaci:是地! 08/06 14:34