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标 题Re: [问题] 如何能更有效率的取得神经细胞?
发信站批踢踢参 (Thu Aug 10 07:29:39 2006)
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※ 引述《[email protected] (新网志开幕....)》之铭言:
: ※ 引述《[email protected] (观察者)》之铭言:
: : 囧,果然弄错了,我一直想说要过滤,所以不清楚这个步骤要干嘛,就取错了。
: : 不过我这次重做,却发生一个奇怪的问题,我在离心後,发现细胞少的可怜,而且学长
: : 的上清液是透明的,但我的上清液却有丝状悬浮,很像棉絮那样,我离好几次都一样,
: : 请问这又是什麽问题呢?
: : 我这次只是在PIPETING时,用力抵住下方,然後歪一点点再用力来回冲,想用水压冲更
: : 散,其他步骤则是和上次一样,请问这是就问题所在吗?
: 细胞还是少的可怜!?
: 怎麽会这样
: 理论上离心完底下应该会有一大沱细胞啊XD
: PIPETING时,建议不要用力抵柱下方
: 这样打散时细胞可能会死不少
: 悬空吸放就可以了
: 至於丝状物我就真的不知道是什麽了
: 我也没遇过
: 会不会是破掉细胞的DNA!?
不知你的Trypsin的浓度如何?
因为依我来看,你Trypsinize的时间太长了,
如此,不仅细胞分离,连细胞都裂解了,
所以,才有一丝丝的丝状物,
也就是DNA
Trypsinize的时间有时真的要看经验,
因为就算时间固定,
但是每次来的Trypsin的效果 有时多多少少还是有差的
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