作者summersnow32 (下之雪)
站内Biotech
标题[问题] 请益PCR的问题
时间Tue Aug 15 14:16:38 2006
这个星期小弟跑了不下十次的PCR
跑的都是GAPDH有时会跑AHR
但是一直都是BAND伴随着SMEAR
有时甚至没有BAND只有SMEAR..
於是乎在下卯起来TEST....
分别试过了以下condition(每一次都是血和泪):
1.拿别人的cDNA来跑-也是时有时无但是必有SMEAR...残念...
2.换一个taq-还是残念...
3.换buffer-残念...
4.调高Tm-....Orz...
5.配新primer-...快哭了...残念....
6.狂抽新RNA-O.D值爆好....但是依旧PCR...残念....
7.全程4度C保鲜-....残废了..
8.降低cycle数....脑残了...
9.换台机器-....直接ko...好惨...
etc...
以下是还没有试过的
1.RT-PCR的cDNA quality test-是这个错误吗?可是他人的cDNA也是降子
2.用更高级的taq-目前是用geneaid的
3.treat香灰泡符水.....天阿....难道只有你能帮我了吗?
4.去拜拜...告解...我没有做过坏事阿...不....
5.还有什麽遗漏的吗?
各位大大...救救小弟我吧...把我从PCR炼狱解救吧...
阿里嘎多...THX...三碗猪脚...拜托拜托....
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.58.13
1F：推 Fourfish:太浓？ 我现在PCR也撞墙中....Orz 08/15 20:41
2F：推 melodyrabbit:比较像是cDNA quality不好,再纯化乾净一点试试看? 08/16 01:12
3F：推 tonyroro:有使用过其他家的KIt 吗?? 好像是cDNA 08/16 11:18
4F：推 summersnow32:那如果是cDNA的问题话，如何更加提高纯度~~谢谢 08/16 17:46