※ 引述《Fourfish (我是？ ￾    )》之铭言： : 之前把PCR product接到TA vector确定insert进去後 : 现在要把insert用RE切下来 （double digest） : RE过後 先用平常DNA电泳的agarose（1.5％）跑过 : 确定有东西且在"1500bp"左右 : 现在问题来了.... : 我把相同的RE後产物 跑完low melting agarose : (我们家用同样agarose粉末 不过是配成0.8%的胶) : 切胶、用kit把DNA elute出来 : 再跑电泳（1.5%胶）确定 结果大小却掉到"1000bp"多一点...... : 想请问这什麽回事... : 只是经过切胶纯化怎麽大小就变了...实在不敢确定那是我要的insert片段 : 可以指点我一下吗...谢谢^^ 我之前作也有这样的状况 因为我作的是promoter的部分，所以学长认为可能形成一些2ndary structure 我把elution product拿去加热到65度10分钟後放回冰上 size的确有恢复 但是冰到-20下次用的时候又变小了... 而且，ligation还是不成功 所以不太确定到底是什麽原因造成的 老师觉得是水太酸，DNA都断掉了，可是又断得太整齐了吧！ 後来用kit附的elution buffer就解决了 不过还有一点奇怪的是，最近用水去elute又很正常了 -- 子在床上曰：「睡觉真舒服！不舍昼夜。」 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.45