作者Fourfish (～四条鱼～)
看板Biotech
标题Re: [问题] DNA elute後大小变了
时间Tue Aug 15 20:40:42 2006
我之前也有做後续的ligation 也没成功...
昨天跟我学长讨论了一会
发现可能是因为double digest的两酵素切位太相似（查过 的确蛮相似的）
且elute过程中的buffer变化
使得DNA产生几个bp的自接 形成circularly form
为了自接 DNA产生些扭曲 像supercoil的结构
在电泳时跑得比较快 所以判断起来变小了
为了确定以上推论 今天RE切的时候
多添加了SAP 减少自接
并经相同elute的步骤
电泳结果确定大小真的没改变了！
这样的推测各位觉得合理吗@@?
※ 引述《MegaFire (怪走该)》之铭言：
: 我之前作也有这样的状况
: 因为我作的是promoter的部分，所以学长认为可能形成一些2ndary structure
: 我把elution product拿去加热到65度10分钟後放回冰上
: size的确有恢复
: 但是冰到-20下次用的时候又变小了...
: 而且，ligation还是不成功
: 所以不太确定到底是什麽原因造成的
: 老师觉得是水太酸，DNA都断掉了，可是又断得太整齐了吧！
: 後来用kit附的elution buffer就解决了
: 不过还有一点奇怪的是，最近用水去elute又很正常了
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◆ From: 140.127.215.12
※ 编辑: Fourfish 来自: 140.127.215.12 (08/15 20:44)
1F：推 ZecAhau:SAP? 08/15 22:16
2F：推 intotheman:CIP之类的去磷酸根? 08/15 22:54
3F：推 Fourfish:对 去磷酸根 08/15 23:35
4F：推 Duckhunter:有可能～合理～ 08/17 10:56
5F：推 kirry:SAP 从SHRIMP 萃取出来的 08/19 23:45